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    人非小細胞肺癌細胞;A549 ,*

    簡要描述:人非小細胞肺癌細胞;A549 ,*
    該細胞系是1972年由GiardDJ通過肺癌組織移植培養建系的,源自一位58歲的白人男性。A549能通過胞苷二磷脂酰膽堿途徑合成富含不飽和脂肪酸的卵磷脂;角蛋白陽性。

    • 產  地:上海
    • 廠商性質:經銷商
    • 更新時間:2021-01-21
    • 訪  問  量:879

    詳細介紹

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    人非小細胞肺癌細胞;A549 ,*
    細胞介紹
    該細胞系由D.J.Griad通過肺癌組織移植培養建系,患者為58歲白人男性。A549能通過胞苷二磷酸膽堿途徑合成含有高含量不飽和脂肪酸的卵磷脂。
     
    細胞特性

    1. 來源:肺癌
    2. 形態:上皮細胞樣
    3. 含量:>1x10個/mL
    4. 污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
    5. 規格:T75瓶或者1mL凍存管包裝

     
    運輸和保存:可選擇干冰運輸及發送復蘇存活細胞方式:(1)干冰運輸,收到后立即轉入液氮凍存或直接復蘇;(2)存活細胞,收到后應繼續生長,傳代達到細胞生長狀態良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。
     
    細胞用途:僅供科研使用。
                          
    人非小細胞肺癌細胞;A549 ,*培養步驟
    一.培養基及培養凍存條件準備

    1. 準備DMEM培養基(DMEM,GIBCO,貨號12800017,添加NaHCO3 1.5g/L)
    2. 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
    3. 凍存液:90%*培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
      • 細胞處理:
    4. 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
    5. 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
    6.  

    1.      棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
    2.      加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
    3.      按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
    4.      將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
    3)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。
     
    注意事項:
    1. 收到細胞后,若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯系。
    2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
     
     

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